CN. Nguyễn Đào Hiếu – 

Xét nghiệm axit nucleic (NAT: Nucleic Acid Testing) là một kỹ thuật sinh học phân tử. Kỹ thuật thực hiện sàng lọc máu nhằm loại bỏ các chế phẩm máu bị nhiễm các tác nhân vi sinh vật như HIV, HCV, HBV, vì vậy kỹ thuật này đáp ứng an toàn truyền máu. 

Kỹ thuật NAT được giới thiệu ở các nước phát triển vào cuối những năm 1990 và đầu những năm 2000. Hiện có khoảng 33 quốc gia trên thế giới đã triển khai NAT đối với vi rút gây suy giảm miễn dịch ở người (HIV) và khoảng 27 quốc gia đối với vi rút viêm gan B (HBV). Kỹ thuật NAT có độ nhạy cao và đặc hiệu đối với axit nucleic của virus. Phương pháp này dựa trên sự khuếch đại các vùng mục tiêu của axit ribonucleic hoặc axit deoxyribonucleic (DNA) của vi rút và phát hiện chúng sớm hơn so với các phương pháp sàng lọc khác, do đó thu hẹp giai đoạn cửa sổ của nhiễm HIV, HBV và vi rút viêm gan C (HCV). NAT cũng bổ sung lợi ích của việc giải quyết các phản ứng giả khi xét nghiệm bằng các phương pháp huyết thanh học, điều này rất quan trọng đối với việc thông báo và tư vấn cho người hiến tặng. 

Trong một nghiên cứu gần đây của Malaysia với 1388 mẫu của người cho đã được xét nghiệm bằng huyết thanh học cũng như NAT, các tác giả đã tìm thấy 1,37% mẫu phản ứng với các phương pháp huyết thanh học tiêu chuẩn nhưng không phản ứng với NAT. Các mẫu này đã được xác nhận là “phản ứng giả” trong các xét nghiệm huyết thanh học xác nhận.

Cấu hình máy hút mẫu Pooling Hamilton, máy Cobas Taqman ( Hãng Roche), máy Cobas AmpliPrep( Hãng Roche) thực hiện kỹ thuật NAT tại Khoa Huyết học – Truyền máu Bệnh viện Đa khoa Quảng Nam

Kỹ thuật NAT phát hiện vi rút HCV lần đầu tiên được giới thiệu ở Đức vào năm 1997 và được thực hiện trên các mẫu tổng hợp của 96 lần hiến máu. Sau đó, khi các quốc gia khác áp dụng kỹ thuật này, quy mô nhóm giảm dần xuống còn 16, 8 hoặc 6 mẫu hiến tặng. Phương pháp gộp mẫu cỡ nhỏ (MP-NAT: mini pool NAT) có thể có ưu điểm là tiết kiệm chi phí nhưng vẫn có một số hạn chế. Toàn bộ quy mô hiến máu gộp sẽ bị chặn cho đến khi có báo cáo NAT. Ngoài ra, khi nồng độ axit nucleic của virus bị pha loãng trong nhóm mẫu lớn, độ nhạy của NAT có thể giảm và nếu một nhóm được thử nghiệm có phản ứng, thì toàn bộ nhóm yêu cầu độ phân giải để xác định đơn vị máu dương tính duy nhất và quá trình này cần thêm một bước xử lý, thêm thời gian để xét nghiệm và do đó trì hoãn việc sử dụng các đơn vị máu. NAT cũng có sẵn để kiểm tra từng đơn vị máu riêng lẻ (ID-NAT) và nếu một đơn vị máu có phản ứng ID-NAT, có thể được nhận dạng để thực hiện kiểm tra phân biệt xác định tác nhân lây nhiễm. Tuy nhiên, điều này có hạn chế là giá thành cao hơn.

Tình hình nghiên cứu kỹ thuật NAT trên thế giới 

Trong một nghiên cứu được thực hiện ở Hoa Kỳ, người ta thấy rằng trong khoảng thời gian 10 năm, khoảng 66 triệu lần hiến tặng đã được sàng lọc với 32 đơn vị phản ứng HIV (1:2 triệu) và 244 đơn vị phản ứng HCV (1:270.000) đã được xác định. Tỷ lệ nhiễm HCV ở những người hiến tặng lần đầu đã giảm 53% trong năm 2008 so với năm 1999. Sự ra đời của HBV NAT ở Hoa Kỳ, cùng với chính sách tiêm phòng HBV đã đóng góp đáng kể vào an toàn máu và giảm nguy cơ nhiễm HBV còn sót lại. Ở Vương quốc Anh, NAT đã giảm 95% nguy cơ HCV và 10% đối với HIV. Hội Chữ thập đỏ Hoa Kỳ đã triển khai NAT triplex tự động đối với HIV, HCV và HBV vào tháng 6 năm 2009. Họ đã phân tích kết quả của mình về năm thử nghiệm đầu tiên và phát hiện ra rằng hiệu suất của MP-NAT (MP16) có ít tác động có thể đo lường được đối với sự an toàn của máu trong việc phát hiện những người hiến tặng có huyết thanh âm tính. Kháng nguyên bề mặt (HBsAg) hiến tặng không phản ứng với MP-NAT, bất kể tình trạng cốt lõi kháng viêm gan B của người hiến tặng

Trong một nghiên cứu thí điểm kéo dài 18 tháng ở Trung Quốc, ID-NAT được so sánh với xét nghiệm miễn dịch enzyme. Người ta quan sát thấy rằng tỷ lệ nhiễm HBV trong quần thể của họ là 1:1056 khi hiến máu.Trong một nghiên cứu từ Ai Cập giai đoạn cửa sổ hiến máu HCV được xác định trong số 15.655 người hiến máu lần đầu (tỷ lệ 1:3100) NAT. Do đó, sàng lọc có thể chứng minh là có lợi hơn khi tỷ lệ huyết thanh của các tác nhân lây truyền qua đường máu cao, như trường hợp ở hầu hết các nước đang phát triển.

Ở Ấn Độ, việc sàng lọc máu bắt buộc đối với HBV, HIV và HCV được thực hiện bằng xét nghiệm huyết thanh tìm HBsAg và kháng thể kháng HIV 1/2 và HCV. Những người hiến tặng huyết thanh âm tính được sàng lọc vẫn có nguy cơ mắc TTI và do đó, cần phải có xét nghiệm sàng lọc nhạy cảm để giảm rủi ro tồn dư này đã giảm đáng kể trong hai đến ba thập kỷ qua ở các nước phương Tây nơi NAT đã được triển khai. Xét nghiệm NAT đã được bắt đầu ở một số trung tâm ở Ấn Độ, nhưng đây không phải là xét nghiệm sàng lọc bắt buộc đối với TTI theo Đạo luật về Dược phẩm và Mỹ phẩm năm 1940 và các quy định trong đó. Rào cản chính trong việc thực hiện xét nghiệm NAT thông thường ở Ấn Độ là chi phí cao và thiếu chuyên môn kỹ thuật ở hầu hết các trung tâm máu.

Trong số hiện tại của tạp chí, ba bài báo về NAT - một đánh giá và hai nghiên cứu ban đầu nêu bật tình thế tiến thoái lưỡng nan hiện nay đối với Ấn Độ. Bài tổng quan của Shyamala thu hút sự chú ý đến khả năng huyết thanh cao của HBV, HCV và HIV ở những bệnh nhân thalassemia được truyền máu nhiều lần, điều này cho thấy sự lây truyền TTI trong giai đoạn cửa sổ bởi các đơn vị huyết thanh âm tính. Một trường hợp thử nghiệm ID-NAT đã được đưa ra. Bài báo của Chatterjee và công sự đã so sánh độ nhạy của thử nghiệm ID-NAT và MP-NAT được đánh giá bằng cách pha loãng các mẫu năng suất NAT. Các tác giả đã quan sát thấy rằng các mẫu có tải lượng vi-rút cao đều được phát hiện ở tất cả các độ pha loãng, nhưng 67% mẫu có tải lượng vi-rút thấp bị MP-NAT bỏ qua và kết luận rằng ID-NAT là phương pháp lý tưởng để sàng lọc TTI. Trong một nghiên cứu của Shivaram, các mẫu huyết thanh âm tính đã được xét nghiệm bằng MP-NAT nội bộ, sử dụng phản ứng chuỗi polymerase phiên mã ngược trong khoảng thời gian 5 năm và nhận thấy chi phí cho mỗi xét nghiệm tăng đáng kể. Năng suất NAT của họ là 0,0006%, thấp so với các nghiên cứu từ các vùng khác của Ấn Độ. Tuy nhiên, độ nhạy phân tích của MP-NAT nội bộ chưa được thiết lập và kết quả có thể không đại diện cho năng suất thực.

Ở Ấn Độ, các trung tâm máu đang dần giới thiệu NAT để cung cấp máu an toàn cho bệnh nhân của họ. Nghiên cứu đa trung tâm đầu tiên được thực hiện bởi Makroo và cộng sự  trong đó tổng cộng 12.224 mẫu cùng với kết quả huyết thanh học của chúng được lấy từ 8 ngân hàng máu ở Ấn Độ và được xét nghiệm riêng lẻ thủ công bằng xét nghiệm procleix ultrio để tìm HIV 1, HCV và HBV. Họ đã quan sát 8 trường hợp năng suất NAT. Theo một nghiên cứu từ phía tây Ấn Độ, tỷ lệ NAT kết hợp (NAT phản ứng/huyết thanh âm tính) đối với HIV, HCV và HBV là 0,034% (1 trong 2972 ​​lần hiến máu)[ 16] cao khi so sánh với các nghiên cứu từ các nước phát triển. Trong một nghiên cứu khác được thực hiện ở phía bắc Ấn Độ, 18.354 người hiến tặng đã được xét nghiệm bằng cả ID-NAT và xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme (ELISA) thế hệ thứ tư, 7 người được phát hiện là dương tính với NAT nhưng âm tính với ELISA (hiệu suất NAT) đối với HBV và HCV. Tỷ lệ mắc NAT ở những người hiến định kỳ là 1 trong 2622 trường hợp hiến được thử nghiệm (0,038%). Sản lượng NAT cao này là do tỷ lệ TTI ở Ấn Độ cao, càng làm nổi bật nhu cầu về NAT ở Ấn Độ. Trong một nghiên cứu khác từ một trung tâm chăm sóc cấp ba ở phía bắc Ấn Độ, kết quả ID NAT được so sánh với phương pháp huyết thanh học đối với 73.898 mẫu, 1,49% có phản ứng với NAT, HIV-1 (0,09%), HCV (0,25%), 1,05% có phản ứng với HBV chỉ và khoảng 0,08% là đồng nhiễm HBV-HCV với tỷ lệ kết hợp là 1 trên 610 lần hiến tặng (tổng cộng 121 lần NAT).

NAT là một kỹ thuật tiên tiến và có độ nhạy cao, giúp giảm thời gian cửa sổ của HBV xuống còn 10,34 ngày; HCV còn 1,34 ngày và HIV còn 2,93 ngày nhưng đòi hỏi kỹ thuật cao, liên quan đến vấn đề chi phí cao; cơ sở hạ tầng, trang thiết bị chuyên dụng, vật tư tiêu hao và chuyên môn kỹ thuật. Nhu cầu về NAT phụ thuộc vào tỷ lệ phổ biến và tỷ lệ mắc bệnh nhiễm trùng trong dân số người hiến máu, nguồn lực sẵn có và bằng chứng về lợi ích khi kết hợp với xét nghiệm huyết thanh học. Do đó, quyết định xét nghiệm NAT nên được xem xét khi hệ thống truyền máu đảm bảo chất lượng cơ bản đã sẵn sàng, chẳng hạn như cơ sở hiến máu tình nguyện, cung cấp dịch vụ tự trì hoãn của người hiến máu, thông báo và tư vấn cho người hiến máu cùng với các phương pháp huyết thanh học nhạy cảm được đảm bảo chất lượng để xét nghiệm sàng lọc các bệnh nhiễm trùng trong truyền máu.